68 OFTALMOLOGÍA APLICACIÓN DE LA SECUENCIACIÓN MASIVA AL DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES OFTALMOLÓGICAS EL DIAGNÓSTICO GENÉTICO DE ESTAS ENFERMEDADES PERMITE CONFIRMAR EL DIAGNÓSTICO CLÍNICO, ESTABLECER EL PRONÓSTICO Y SELECCIONAR LA TERAPIA MÁS INDICADA PARA CADA PACIENTE. ADEMÁS, PERMITE OFRECER UN ASESORAMIENTO GENÉTICO A LA FAMILIA, ESTABLECIENDO EL PATRÓN DE HERENCIA DE LA PATOLOGÍA E INDICANDO LA PROBABILIDAD DE TRANSMITIRLA. El desarrollo de la tecnología de secueciación masiva o Next-generation Sequencing (NGS) ha permitido llevar a cabo un extraordinario salto tecnológico en el abordaje de los estudios genéticos. Este desarrollo, junto con los avances en el campo de la bioinformática, permiten hoy en día el estudio masivo y simultáneo de millones de fragmentos de ADN en un único experimento, ayudando a encontrar respuesta a muchas de las cuestiones inherentes al desarrollo de las enfermedades genéticas humanas. Además, el abaratamiento progresivo de los costes de secuenciación hace que cada año sean más los grupos de investigación interesados en estudiar enfermedades genéticas empleando secuenciación masiva, al mismo tiempo que aumenta la cantidad de enfermedades humanas en las que se aplica a nivel asistencial. Entre las principales aproximaciones de análisis NGS que existen en la actualidad encontramos, a nivel de ADN: • Estudio de genoma completo (WGS, Whole Genome Sequencing) en el que se secuencia el 100 % del ADN. • Estudio de exoma completo (WES, Whole Exome Sequencing), en el que se secuencia el 2 % del ADN que ocupan los genes. • Análisis del subconjunto de genes específicos implicados en la patología que se quiere estudiar. Este análisis puede realizarse de dos maneras: mediante el uso de paneles de captura o mediante exomas dirigidos. De estas tres opciones, actualmente, la aproximación más utilizada a nivel diagnóstico son los exomas dirigidos, los cuales implican la secuenciación de todas las regiones genómicas codificantes para la obtención de la máxima información genética posible del paciente. A partir de la secuenciación de más de 22.000 genes se pueden seleccionar, de manera secuencial, los genes a estudiar en función del fenotipo del paciente. Una vez obtenidos los datos de secuenciación, se analizan las diferentes variantes en base al conocimiento científico actual y desde un punto de vista clínico. Además, el estudio de exoma completo ofrece dos ventajas muy importantes: 1) la posibilidad de identificar nuevos genes con significado clínico y detectar nuevas variantes o genes asociados a la patología aún no descritos; 2) proporciona la opción de reanalizar nuevos genes candidatos que sean asociados a patología en el futuro sin necesidad de volver a secuenciar, lo que disminuye costes y tiempos de respuesta. Por su parte, a nivel de ARN, destacan los estudios de expresión de genes mediante la secuenciación RNA-seq. En este caso, el objetivo no es identificar variantes genéticas presentes en el ADN, sino cuantificar los niveles de expresión génica y relacionarla con
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